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周密的實驗設(shè)置方案,以及成像前對細(xì)胞的優(yōu)化、可重復(fù)的處理,是顯微鏡實驗成功的關(guān)鍵。為此,必須考慮幾個因素,這些因素取決于顯微鏡方法和所使用的一般設(shè)置。那么,實驗方案的關(guān)鍵問題是什么?
*如何為您的實驗和顯微鏡技術(shù)選擇應(yīng)用幾何形狀的實驗器皿?
存在多種細(xì)胞培養(yǎng)容器以滿足不同細(xì)胞培養(yǎng)測定的復(fù)雜性,例如使用懸浮或粘附細(xì)胞的實驗、2D或3D測定、單培養(yǎng)或共培養(yǎng)測定等等。主要培養(yǎng)容器的幾何形狀(如生長面積和體積)是影響實驗結(jié)果和解釋的重要因素,在開始之前應(yīng)仔細(xì)考慮。此外,容器幾何形狀影響實驗中的物理(例如蒸發(fā))和光學(xué)(例如彎液面效應(yīng))特性。
ibidi的解決方案
ibidi提供各種幾何形狀的成像小室
*您為您的特定細(xì)胞類型和顯微鏡方法選擇了合適的基底、表面和涂層了嗎?
細(xì)胞的培養(yǎng)、生長、發(fā)育和信號傳導(dǎo)強烈依賴于用于細(xì)胞培養(yǎng)的表面。此外,光學(xué)規(guī)格要求強烈決定了哪種基底是可取的。硼硅酸鹽玻璃被廣泛用作基底,然而,涂層可能是支持細(xì)胞粘附所必需。然而,如果細(xì)胞表面需要特定的細(xì)胞外基質(zhì),則可以使用涂層,例如膠原I、膠原IV或聚-L-賴氨酸。對于懸浮細(xì)胞或球體培養(yǎng),則應(yīng)使用非粘附表面,如ibidi Bioinert生物惰性表面。此外,還需要考慮是進(jìn)行2D還是3D實驗。
ibidi的解決方案
ibidi µ-Slides, µ-Dishes, and µ-Plates的突出特點是其超薄的蓋玻片底部,非常適合顯微鏡應(yīng)用。ibidi提供 ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的實驗器皿;也提供具有各種表面和涂層的成像小室,例如用于直接培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的ibiTreat (tissue culture-treated) ibiTreat(組織培養(yǎng)處理的)表面。
Non-Adherent Bioinert Surface非貼壁生物惰性表面是一種穩(wěn)定、生物惰性的表面,用于在沒有任何細(xì)胞或生物分子粘附的非粘附表面上對類器官、球體和懸浮細(xì)胞進(jìn)行長期培養(yǎng)和高分辨率顯微鏡觀察。目前有 µ-Dish?35mm, high?Bioinert?! ?/p>
ibidi µ-Patterning technology實現(xiàn)了各種2D和3D細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用的空間定義的細(xì)胞粘附。小型化的粘合劑圖案(例如,線、正方形或點)不可逆地印刷在ibidi Polymer Coverslip的非粘性生物惰性表面上,從而實現(xiàn)精確控制的細(xì)胞粘附。
*您能確保細(xì)胞在培養(yǎng)過程中以及整個成像過程中都是健康的嗎?
顯微鏡可以做活細(xì)胞和固定細(xì)胞,這取決于實驗設(shè)置和所需的讀數(shù)。因此,任何成像實驗都只能使用有活力和健康的細(xì)胞。為了確保這一點,應(yīng)每天在顯微鏡下控制細(xì)胞附著、形態(tài)、融合、營養(yǎng)供應(yīng)和污染跡象。此外,一些參數(shù),如溫度和濕度,必須保持一致?! ?/p>
ibidi的解決方案
許多顯微鏡技術(shù),如相位對比、寬場熒光和共聚焦顯微鏡,都可以不受限制地使用任何具有ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的ibidi實驗器皿?! ?/p>
*當(dāng)計劃一個活細(xì)胞成像實驗時,您的設(shè)置是否滿足所有必要的要求?
如果連續(xù)或在特定時間點需要多個圖像,那么活細(xì)胞成像可能是您的較佳選擇。為了在活細(xì)胞成像實驗中保持細(xì)胞的存活和健康,須在顯微鏡上建立和維持生理條件—與培養(yǎng)箱內(nèi)的設(shè)置相同。
ibidi的解決方案
ibidi Stage Top Incubation Systems 孵育系統(tǒng)可用于載玻片/培養(yǎng)皿和多孔板。它允許在任何倒置顯微鏡上進(jìn)行短期和長期分析期間準(zhǔn)確可靠地控制重要的活細(xì)胞成像參數(shù)。如果需要額外控制氧氣水平,ibidi Stage Top Incubation Systems, CO2/O2 孵育系統(tǒng)是理想的解決方案?!?/p>