實驗?zāi)康模?/strong>此次實驗樣品為人全血DNA；需要對生物DNA生物樣本需要打斷到150-300bp進(jìn)行后續(xù)的測序建庫實驗，為得到這一片段長度下的樣本，需進(jìn)行梯度預(yù)實驗。

　　實驗設(shè)備：高通量聲波基因組剪切儀 JXDNA-500PICO

　　樣品前處理實驗操作過程：

　　1.在實驗開始前，需要先提前準(zhǔn)確好實驗超聲波剪切設(shè)備以及實驗所需應(yīng)用的耗材和若干的實驗樣品

　　2.將適配器放入水槽中，再打開冷水機對其進(jìn)行預(yù)冷直至4度

　　3.對生物樣本進(jìn)行稀釋，將其稀釋到同一濃度

　　4.把稀釋好的同一濃度的DNA樣本按照體積梯度將其投入樣品離心管內(nèi)，標(biāo)好編號，震蕩離心

　　5.把帶有樣品的離心管放入儀器的適配器內(nèi)，但要注意水平配平，盡量將樣品放置在適配器外圈

　　6.啟動儀器，調(diào)節(jié)程序運行參數(shù)，設(shè)置好能量，工作時間，間隙時間，循環(huán)工作，總時長梯度為17min，20min，25min

　　7.待儀器程序運轉(zhuǎn)結(jié)束后，即可取出樣本，進(jìn)行電泳檢測

　　實驗操作注意事項：

　　1.同等條件下人體DNA樣本的打斷難度大于小鼠大于植物，而不同的實驗樣品需單獨進(jìn)行預(yù)實驗，不可混用實驗結(jié)果

　　2.注意樣品離心管內(nèi)的樣本體積，需確保儀器內(nèi)水位要蓋住樣品

　　3.離心管需要配平，適配器壓蓋禁止傾斜，避免樣本開蓋污染

　　4.冷水機需要提前打開預(yù)冷，水流循環(huán)要調(diào)整穩(wěn)定不能過于激烈

　　樣品前處理實驗結(jié)果：

　　綜上結(jié)果可見，樣品投入量能影響檢測熒光強度，超聲打斷時間能影響片段長度。綜合下機樣品的片段長度和熒光強度，以及片段集中性，選擇20μL打斷25min作為實驗條件。

　　在高通量測序樣本制備過程中，DNA片段化處理是一個核心步驟。因此隨機、準(zhǔn)確、集中無偏差的DNA片段化是保證DNA文庫質(zhì)量和均一性的關(guān)鍵一步。高通量聲波基因組剪切儀采用等溫、非接觸的方式對樣品進(jìn)行打斷、勻漿和混合，為DNA片段化又提供了新的研究手段，進(jìn)一步推動了分子生物學(xué)的研究發(fā)展。