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導(dǎo)言
近幾年來,3D(three dimensional)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)開始成為生物學(xué)研究新的研究方法。使用3D系統(tǒng)培養(yǎng)系統(tǒng)能更好的模擬生物體內(nèi)的真實生理環(huán)境,而2D(傳統(tǒng)的貼壁培養(yǎng))細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)不能有效的模擬細(xì)胞在生物體內(nèi)的生理環(huán)境。3D細(xì)胞技術(shù)有很多種方法,使用多細(xì)胞形成的細(xì)胞團(tuán)是其中主要的研究應(yīng)用之一。細(xì)胞團(tuán)是微小的細(xì)胞聚集簇,可以用來研究3D情況下向外生長的情況(細(xì)胞出芽)。
一.實驗原理
目前有幾種方法可以用來生成細(xì)胞團(tuán)。 所有方法的原理都是防止細(xì)胞貼壁,并且創(chuàng)造環(huán)境增強(qiáng)臨近細(xì)胞間的細(xì)胞外基質(zhì)的粘附。這里我們提供的是一個液體膠的形式來形成細(xì)胞團(tuán)。這是一種形成細(xì)胞團(tuán)的非常簡單的方法,有如下的優(yōu)勢:
1)可以形成單個細(xì)胞團(tuán),并且易于用顯微鏡觀測;
2)易于換液,可以進(jìn)行長時間的培養(yǎng);
3)這個方法操作簡單,不需要額外的設(shè)備就能完成。
簡單來講就是先在多孔板底部加入瓊脂糖,之后再加入細(xì)胞懸液。加入瓊脂糖不僅僅是提供了個疏水表面,細(xì)胞不會粘附,又提供了一個凹液面,細(xì)胞可以聚集在凹孔中,加大了細(xì)胞和細(xì)胞之間接觸的幾率,增強(qiáng)了細(xì)胞之間的粘附。
二.實驗材料
96孔板,平底(Corning 3370)
血管生成載玻片(德國ibidi,81506)
1.5%瓊脂糖(Sigma,A9539,使用PBS或者超純水配置)
胰酶
Matrigel
細(xì)胞培養(yǎng)基
三.成團(tuán)實驗步驟
1)96孔板預(yù)處理
2.細(xì)胞成團(tuán)
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圖一:不同細(xì)胞系的成團(tuán)過程(每孔500個細(xì)胞),比例尺 200μm。
四.出芽實驗及分析
實驗步驟:
2.凝膠
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3.細(xì)胞出芽實驗及圖像分析