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傷口愈合實(shí)驗(yàn)是體外研究細(xì)胞遷移的的一個(gè)有用的實(shí)驗(yàn)。原理是人為的在鋪板的單層細(xì)胞中制造一個(gè)空白的無(wú)細(xì)胞的地帶,然后對(duì)這個(gè)無(wú)細(xì)胞地帶的邊緣的細(xì)胞進(jìn)行觀察;這些邊緣的細(xì)胞會(huì)開始進(jìn)行遷移活動(dòng),并且終覆蓋整個(gè)無(wú)細(xì)胞的區(qū)域,重新互相接觸在一起。法國(guó)的科研人員在2015年的 STEM CELL上發(fā)的文章中提出神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體(proNGF)會(huì)自動(dòng)的激活乳腺癌干細(xì)胞,并且發(fā)生侵襲。文中,使用乳腺癌細(xì)胞系和腫瘤分離的細(xì)胞進(jìn)行傷口愈合實(shí)驗(yàn),得出,由NGF處理的腫瘤離的乳腺癌細(xì)胞的傷口愈合速率有非常顯著的提高。說明在NGF能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移活動(dòng)。
Nerve Growth Factor and proNGF Simultaneously Promote Symmetric Self-Renewal, Quiescence, and Epithelial to Mesenchymal Transition to Enlarge the Breast Cancer Stem Cell Compartment
E. Tomellini, Y. Touil, C. Lagadec, S. Julien, P. Ostyn, N. Ziental-Gelus, S. Meignan, J. Lengrand, E. Adriaenssens, R. Polakowska and X. Le Bourhis
STEM CELLS, 2015, 10.1002/stem.1849
在文中,使用Ibidi開發(fā)的傷口愈合插件進(jìn)行了傷口愈合實(shí)驗(yàn)。這是一種雙孔的硅膠插件,可以放在培養(yǎng)皿中,插件兩孔間的孔壁寬度為500μm。將細(xì)胞種在插件中,等待細(xì)胞貼壁長(zhǎng)滿后,將插件移除,這樣,兩孔間的縫隙就是一個(gè)無(wú)細(xì)胞的“劃痕”。
bFGF (R&D,233-FB)
NGF (Scil Protein)
proNGF (Alomone Labs,N-285)
圖三:A. 去除培養(yǎng)皿底部的保護(hù)膠帶。B.C.在ibidi傷口愈合插件中加入細(xì)胞。
(三)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
如圖所示,ML表示MCF-7 細(xì)胞系。腫瘤分離細(xì)胞團(tuán)分別由EGF、bFGF、NGF和proNGF處理,由t-EGF/bFGF、t-NGF、t-proNGF表示??梢钥吹接?/span>NGF處理的細(xì)胞,在4h的時(shí)候覆蓋面積大,遷移速率快。